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液相色譜儀組成

更新時(shí)間:2017-04-24      點(diǎn)擊次數:2702
液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統,下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)?! ?/div>
1.進(jìn)樣系統一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的?! ?/div>
2.輸液系統該系統包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47~3.4X107Pa,流速可調且穩定,當高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯和梯度儀,可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離?! ?/div>
4.分離系統該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長(cháng)度為10~50cm(需要兩根連用時(shí),可在二者之間加一連接管),內徑為2~5mm,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內裝有直徑為5~10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構成).固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹(shù)脂或硅膠構成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點(diǎn),加之其表面經(jīng)過(guò)機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(cháng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。因此,這類(lèi)固定相對結構不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來(lái)?! ×硗?,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區內傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,會(huì )提高分辨率的道理。再者,液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C,通過(guò)改善傳質(zhì)速度,縮短分析時(shí)間,就可增加層析柱的效率。

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