現代高效液相色譜分析中，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開(kāi)發(fā)所需的時(shí)間，并且使方法更具穩定性。但是現在市場(chǎng)上色譜柱種類(lèi)繁多，不同類(lèi)型的色譜柱分離對象不同，因此，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。
柱長(cháng)，內徑，如250*4.6mm。一般柱長(cháng)在2—250mm，柱越長(cháng)，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時(shí)間更長(cháng)；但分離度與理論塔板數的平方根成正比，所以一昧增加柱長(cháng)并不是*的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
粒徑，影響色譜分離度。粒徑越小，分離越快，柱效越高，但柱壓力越高，柱容易被污染，導致柱壽命降低。常見(jiàn)分析柱通常使用5um填料，復雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑，更大內徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據現實(shí)情況而定。本文來(lái)源于國內的第三方檢測平臺嘉峪檢測網(wǎng)，提供檢測實(shí)驗、技術(shù)培訓、儀器計量校準服務(wù)。
孔徑，60A，120A，300A等?？讖叫?，則含孔率高，比表面積大，載碳量高；色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內表面的鍵合相進(jìn)行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。
顆粒形狀，一般有球形和不規則形，當使用黏度較大的流動(dòng)相時(shí)，球形顆?？梢越档椭鶋?，延長(cháng)色譜柱壽命。
比表面積，指的是每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g，與粒度和含孔率有關(guān)；比表面積大，會(huì )增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保留和分離度；比表面積小則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間，并不是比表面積大或者小就更好，需要選擇合適的比表面積。
硅膠基質(zhì)：通用的基質(zhì)，強度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達到1—12)。
聚合物基質(zhì)：多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩定，應用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好；但強度較小，有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損，批次重復性較差，商品化色譜柱不多，一般價(jià)格較貴。
載碳量：基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。
鍵合相：鍵合試劑不同，對化合物的選擇性不同，一般長(cháng)鏈的烷基鍵合相(C18C8)比短鏈的(C4C3)穩定；非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩定。
封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來(lái)，以減少殘留的硅醇基，減輕待測組分與酸性硅羥基反應而引起的色譜峰拖尾現象。尤其對于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差?！?/span>
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